Evaluación de la efectividad de un desinfectante mediante el método de placas de contacto / Evaluation of the effectiveness of a disinfectant through the contact plate method

Objetivo: evaluar la efectividad del desinfectante LopHene ST mediante el método de placas de contacto. Métodos: se tomó 1 mL de la suspensión de los microorganismos de referencia (bacterias, levadura y un hongo filamentoso) y se esparció sobre una superficie de material análogo al material donde se aplica el desinfectante. En posiciones aleatorias en réplicas de tres, se realizó el muestreo de superficie con placas de contacto que contenían agar triptona soya y sabouraud dextrosa agar, más neutralizante. Se incubaron a 32 ± 2 ºC de 3 a 5 días y 22 ± 2 ºC de 5 a 7 días, según tipo de microorganismo a ensayar. Se contaron las unidades formadoras de colonias en las placas (control positivo). Sobre una superficie de igual dimensión, se aplicó el desinfectante preparado (concentración: 4 %) con 10 min de exposición. Se procedió de igual manera que con el control positivo, se tomó como criterio de aceptación una reducción del número de microorganismos en al menos 3 logaritmos. Resultados: los tres lotes evaluados mostraron que el desinfectante redujo la concentración de las bacterias en un rango de 4,60 a 7,20 logaritmos. Para la levadura la reducción fue de 4,70 a 5,40 logaritmos y para el hongo filamentoso ensayado los valores estuvieron entre 4,10 y 5,50 logaritmos. Conclusiones: el desinfectante LopHene ST es eficaz frente a las cepas de microorganismos ensayadas en el tiempo evaluado y a la concentración probada; con esto se confirma su capacidad bactericida y fungicida bajo las condiciones estudiadas. Además se demuestra que el método empleado resulta válido para el análisis de la efectividad de los lotes de desinfectante evaluados, al mostrar la reducción de las colonias.

Objective: to evaluate the effectiveness of disinfectant LopHene ST by contact plates method. Methods: one ml of the suspension of reference microorganisms (bacteria, yeast and a filamentous fungus) was taken and spread over a surface made of a material similar to that in which the disinfectant was applied. At random positions and in three replications, the surface was sampled by the contact plates method containing Tryptone Soy Agar and Sabouraud Dextrose Agar plus neutralizing substance. Microorganisms were incubated at 32 ± 2 ºC for 3 to 5 days and at 22 ± 2 ºC for 5 to 7 days, depending on the type of microorganism to be tested. Colony-forming unit on the plates (positive control) were counted, then the prepared disinfectant (4 % concentration) was used over an equal sized area during 10 minutes. The procedure was exactly the same as in the positive control; a reduction of the number of microorganisms by at least 3 logarithms, was adopted as acceptance criteria. Results: the disinfectant reduced the bacterial concentration in a range from 4.60 to 7.20 logarithms for the three tested batches. In the case of yeast, reduction was 4.70 to 5.40 logarithms and for the filamentous fungus, the reduction ranged from 4.10 to 5.50 logarithms. Conclusions: LopHene ST disinfectant is effective for the tested microorganism strains in the evaluated time lapse and at the tested concentration. This confirms the bactericidal and fungicidal capacity of this product under the studied conditions. It was also shown that the method is valid for the analysis of effectiveness of the evaluated disinfectant batches since the colonies were reduced.

Medidas de bioseguridad adoptadas en el manejo con materiales biológicos en Laboratorios Liorad / Biosafety measures adopted in Liorad Laboratories for handling biological materials

Introducción: el trabajo con microorganismos puede conllevar a riesgos tanto para el personal que trabaja con los mismos como para el medio ambiente. La existencia de laboratorios de seguridad biológica y la implementación de medidas en la manipulación de los agentes biológicos minimizan el riesgo. Objetivo: evaluar las medidas de bioseguridad adoptadas en el manejo con materiales biológicos en Laboratorios Liorad. Métodos: empleo de una lista de chequeo y análisis de los resultados a través de una Matriz DAFO para valorar si el diseño de la instalación cumple con la bioseguridad. Además establecer un sistema documental para la manipulación de microorganismos y la confección de un plan de capacitación para el personal que trabaja en el laboratorio de control microbiológico. Resultados: la lista de chequeo permitió identificar como principal debilidad el no disponer de un doble pasillo para el traslado del material limpio y sucio. Como fortalezas, cumplir con las prácticas y procesamientos adecuados y el contar con equipos de seguridad biológica. El sistema documental incorporó a los procedimientos establecidos para la manipulación, un acápite referido a la Peligrosidad y Medidas de Seguridad. El programa de capacitación desarrollado permitió proveer conocimientos específicos referidos a esta temática. Conclusión: las medidas adoptadas en el laboratorio permiten plantear que de manera general se cumplen los requisitos establecidos en materia de Bioseguridad para el trabajo con microorganismos

Introduction: working with microorganisms can lead to risks for both the staff at work and the environment. The existence of biosafety labs and implementation of measures in the handling of biological agents minimize the risk. Objetive: to evaluate biosecurity measures taken in handling biological materials at Liorad Laboratories. Methods: using a checklist and analysis of results through a SWOT Matrix to assess whether the design of the facility complies with biosafety or not. A documented system for handling of microorganisms and the preparation of a training plan for staff working in the laboratory of microbiological control. Results: the checklist identified as the main weakness the absence of a double corridor for the transfer of clean and dirty equipment, and as strength, meeting processing practices and have adequate biosafety equipment. The documentation system incorporated a section related to Threat and Safety Measures into the handling procedure. The training program developed allowed providing specific knowledge about this topic. Conclusion: it was concluded that the measures taken in the laboratory facilitated the overall fulfillment of the biosafety requirements for working with microorganisms

Valoración de endotoxinas bacterianas en el inyectable ácido zoledrónico mediante la prueba de lisado del amebocito de Limulus / Assessment of bacterial endotoxins in Zoledronic acid injectable drug by using Limulus amebocyte lysate test

Objetivo: valorar las endotoxinas bacterianas por la técnica del lisado del amebocito de Limulus para el producto inyectable ácido zoledrónico, por el método de gelificación. Métodos: el ensayo se realizó mediante dos pruebas: 1) confirmación de la sensibilidad del lisado etiquetado, para lo cual se preparó una curva estándar con diluciones seriadas dobles de endotoxina por cuadruplicado; y 2) el ensayo del producto de inhibición, en el que se prepararon diluciones seriadas dobles de endotoxina con agua apirogénica y con las muestras de los lotes a ensayar sin sobrepasar la máxima dilución válida. Se determinó el punto final y se calculó la media geométrica. Se definió la dilución de trabajo, la cual se validó por cuadruplicado en tres lotes consecutivos. Resultados: la sensibilidad del lisado resultó 0,03125 UE/mL. La máxima dilución válida fue de 112 UE/mL y la dilución de trabajo 1/100. La cantidad de endotoxinas bacterianas presentes en tres lotes del producto inyectable no sobrepasó el límite establecido, por lo que cumplió con las especificaciones de calidad establecidas para el ensayo. Conclusión: la estandarización de las condiciones del método por gelificación, hace que este resulte eficaz, confiable, rápido y de fácil ejecución, por lo que puede emplearse como ensayo de rutina en el control de la calidad del inyectable analizado

Objective: To asses the presence of bacterial endotoxins in Zoledronic Acid injectable drug by using the Limulus amebocyte lysate test, particularly by the gelling procedure. Methods: The assay was performed in two tests: the first was the confirmation of labeled lysate sensitivity by preparing a standard curve with serial double dilutions of endotoxins four times, and the second was the inhibition product test in which serial double dilutions of endotoxins were prepared with apyrogenic water and with samples from the batches to be tested, without exceeding the maximum valid dilution. The end point was determined and the geometric mean was calculated. Working dilution was defined and then validated four times in three consecutive batches. Results: The lysate sensitivity was 0.03125 EU/mL). The maximum valid dilution and the working dilution were 112 EU/mL and 1/100 EU/mL) respectively. The amount of bacterial endotoxins present in three batches of the injectable drug did not exceed the set limit, so it complied with the quality specifications for this test. Conclusions: The standardization of the gelling method conditions makes it possible to state that this method is effective, reliable, quick and easy-to-perform, so it can be used as a regular test in the quality control of the analyzed parenteral drug